Uvod
Standardna analiza sjemena je subjektivna tehnika. Zbog razlika u načinu rada laboratorija, gotovo je nemoguće uspoređivati pokretljivost spermija analiziranu u različitim laboratorijima. Kako bi se procjena pokretljivosti sjemena učinila što objektivnijom i detaljnijom, razvijena je računalna analiza pokretljivosti spermija (engl. computer-aided sperm analisys, CASA). CASA analizom dobije se nekoliko specifičnih parametara pokretljivosti spermija, što je čini objektivnijom od standardne analize sjemena. Također, ova analiza ima veću točnost i reproducibilnost broja i pokretljivosti spermija.
Razvijanje CASA analize, koja može identificirati i pratiti humane spermije, predstavlja veliki napredak u istraživanju pokretljivosti humanog sjemena. Paralelno s pokušajima unapređivanja tehničkih karakteristika CASA sistema, važno je istražiti biološku važnost CASA parametara u smislu predviđanja oplođujućeg potencijala spermija. Ova znanja su od velike važnosti za razumijevanje biologije oplodnje kao i za dijagnosticiranje i liječenje muške neplodnosti.
Cilj ovog istraživanja bio je ispitati povezanost kvalitete spermija dobivene CASA analizom s učestalošću oplodnje in vitro. Želimo ustanoviti mogu li CASA parametri i koje njihove vrijednosti ukazivati na prenisku oplođujuću sposobnost spermija koja zahtijeva korištenje mikroinjekcije (engl. intracytoplasmatic sperm injection, ICSI) pri oplodnji oocita.
DALJNJA LITERATURA:
Ispitanici
Prosječna dob žena uključenih u postupak IVF/ET bila je 32,8 godina, dok je prosječna dob muškaraca bila 33,7 godina. Indikacije za upotrebu u klasičnim IVF-ET postupcima bile su: tubarni faktor, muški faktor, uterini faktor i nerazjašnjena neplodnost.
Metode
Ukupno 36 svježih uzoraka sjemena analizirano je CASA metodom. Spermiji su pripremljeni ‘swim up’ metodom i upotrijebljeni za izvantjelesnu oplodnju oocita dobivenih u 36 IVF ciklusa.
CASA parametri
Kvaliteta sjemena određena je CASA analizom (HTM-IVOS, Version 12, Hamilton Thorne Biosciences, Beverly MA, USA). Spermiji iz svježeg sjemena prebrojeni su, a zatim je određena koncentracija spermija, pokretljivost i parametri pokretanja spermija. Parametri pokretanja spermija su VAP (prosječna brzina kretanja), VSL (brzina pravocrtnog kretanja), VCL (brzina nepravilnog kretanja), ALH (amplituda postraničnog pomicanja glave spermija), BCF (učestalost udaraca repom), STR (pravocrtnost), LIN (linearnost).
Obrada sjemena
Količina od 0,5-1 ml sjemena dobivenog masturbacijom podslojena je ispod 1-2 ml medija za pročišćavanje spermija (Sperm Preparation Medium, MediCult, Danska) i inkubirana 40 minuta na 37oC i 5% CO2 u inkubatoru. Supernatant s pokretnim spermijima je sakupljen i centrifugiran 10 minuta na 1500 okretaja (Hettich Universal 32R). Talog je resuspendiran u 0,3 ml univerzalnog medija (Universal IVF Medium, MediCult) i karakteristike pokretljivosti spermija određene su CASA sistemom.
Sperm Morphology Analysis
Stimulacija
Kontrolirana ovarijska stimulacija započeta je u sredini lutealne faze kombinacijom gonadotropin releasing hormon (GnRH) agonista (GnRHa; Decapeptyl, Ferring, Njemačka) i rekombinantnog folikul stimulirajućeg hormona (r-FSH; Gonal-F, Serono, Švicarska). Kada je vodeći folikul dosegao 17 mm u dijametru, bolesnice su dobile 250mg rekombinantnog humanog korionskog gonadotropina (hCG; Ovitrelle, Serono). Tridesettri do tridesetšest sati nakon davanja hCG, napravljena je ultrazvučno vođena aspiracija oocita.
Oplodnja oocita i uzgoj embrija
Oocite su izolirane iz folikularne tekućine dobivene aspiracijom folikula, isprane u hranilištu za ispiranje (Syn Vitro Flush, MediCult, Danska) te stavljene u univerzalno hranilište (IVF Universal, MediCult) i pohranjene na 37oC i 5% CO2 u inkubator. Nakon 2-3 sata oocite su prebačene u kapi univerzalnog hranilišta pod uljem (Tissue Culture Oil, MediCult) i inseminirane sa cca. 100 000 spermija/ml. Oplodnja je provjerena 18-20 sati nakon inseminacije, a nakon 24-28 sati ocijenjena je rana dioba embrija.
Svih 36 postupaka inseminacije in vitro (engl. in vitro fertilization, IVF) klasificirano je u dvije skupine: bez oplodnje (13 ciklusa) i sa ? 50% oplodnje (23 ciklusa).
Cilj ovog rada je odrediti koji CASA parametri mogu poslužiti kao indikatori potencijala spermija za oplodnju, tj. pomoći pri odluci koja će se metoda oplodnje koristiti, IVF ili ICSI.
Rezultati
U 36 IVF ciklusa prosječan broj sakupljenih jajnih stanica bio je 10,3. Cjelokupan postotak oplodnje bio je 47,2%. U 13 ciklusa nije došlo do oplodnje. CASA parametri u svježem ejakulatu i nakon pročišćavanja bili su uspoređivani između 23 ciklusa s postotkom oplodnje ?50% i 13 ciklusa bez oplodnje (tablica 1, slika 1).
DALJNJA LITERATURA:
Rasprava i zaključak
Budući da fertilizacija ovisi ne samo o spermiju nego i o kvaliteti jajne stanice, teško je bilo odrediti njihov udio značajnosti u fertilizacijskom procesu.
U našoj studiji analizirali smo CASA parametre humanog sjemena, ali nismo kvantificirali i kvalitetu jajne stanice. Objektivnije bi bilo kada bismo odredili i kvalitetu jajne stanice, kao i CASA parametre spermija s ciljem da odredimo kojoj ćemo fertilizacijskoj metodi pristupiti: IVF ili ICSI.
Naša studija demonstrira da CASA parametri VAP, VSL i VCL, kao i MOTILITY i RAPID CELLS parametri svježeg sjemena koreliraju s fertilizacijom, što indicira njihovu prediktivnu moć za uspješnost oplodnje. Parametri VAP i VCL su u pozitivnoj korelaciji, kako je i prikazano na slici 2. Morat će se učiniti daljnja istraživanja koja će uključiti još neke metode, poglavito molekularne, i više slučajeva, kako bismo došli do konačnog zaključka i sveobuhvatne slike.
::Tamara Tramišak-Milaković :: Laboratorij za biologiju reprodukcije, Odjel za humanu reprodukciju :: Klinika za ginekologiju i porodništvo, KBC Rijeka :: E-mail:
ivf@kbc-rijeka.hr
izvorni članak
|
Medicina 2007;43:263-266
|
| |
Literatura:
1. Jorgensen N, Auger J, Giwercman A et al. Semen analysis performed by
different laboratory teams: an intervariation study. Int J Androl
1997;20:201-8.
2. Larsen L, Scheike T, Jensen TK, Bonde JP, Ernst E, Hjollund NH, Zhou
Y, Skakkebaek NE, Giwercman A and The Danish First Pregnancy Planner
Study Team. Computer-assisted semen analysis parameters as predictors
for fertility of men from the general population. Hum Reprod
2000;7:1562-67.
3. Hirano Y, Shibahara H, Obara H, Suzuki T, Takamizawa, S, Yamaguchi, C
i sur. Relationships between sperm motility characteristics assessed by
the Computer-Aided Sperm Analysis (CASA) and Fertilization Rates In
Vitro. J Assist Reprod Genet 2001;4:213-8.
|
:: važne pravne informacije ::
HDGO portal pruža stručne informacije o brojnim temama i
događanjima u ginekologiji, opstetriciji i humanoj reprodukciji. Svrha
navedenih informacija nije davanje medicinskih savjeta ili uputa o
uporabi pojedinih proizvoda niti promocija pojedinih proizvoda kao
takvih. Niti jedan posjetitelj web portala ne smije koristiti
informacije sadržane na ovom portalu za dijagnosticiranje ili liječenje
zdravstvenog problema ili bolesti bez savjetovanja sa stručnim
medicinskim osobljem jer su informacije objavljene na portalu predviđene
kao dodatak, a ne kao zamjena za stručnost, vještinu, znanje, iskustvo
i procjenu specijaliste za ginekologiju i opstetriciju koji se brine o
bolesnici, odnosno trudnici.
HDGO je poduzeo i ubuduće će poduzimati odgovarajuće napore
kako bi informacije sadržane na ovom web portalu bile točne i precizne,
ali istovremeno ne daje nikakva jamstva glede njihove potpunosti.
Shodno tome, takve informacije ne mogu služiti kao predložak za sudsko
medicinska vještačenja. Takve informacije HDGO priopćuje svojim
članovima na redovitim okupljanjima i putem stručnih smjernica odobrenih
od strane nadležnih tijela.
Stručne smjernice HDGO donose se prema strogim stručnim pravilima i
specifičnim uvjetima ginekološke i opstetričke struke u RH, te se nakon
odobrenja od strane nadležnih tijela objavljuju s posebnom napomenom.